羧肽酶B的应用及制备方法你了解多少?

发布时间:

2021-04-15


羧肽酶B(carboxypeptidase B,简称 CPB,)是一种含锌的胰外肽酶。CPB含307个氨基酸,分子质量 35ku。由于 CPB特异的水解肽链C端的碱性氨基酸(精氨酸,赖氨酸或鸟氨酸),所以其可用于蛋白质和多肽的序列分析,特别是用来确定羧基端氨基酸

羧肽酶B用途

1.用于蛋白质 C-末端碱性氨基酸(赖氨酸、精氨酸、组氨酸)的水解;

2.用于蛋白质 C-末端氨基酸的鉴定;去除蛋白质C-末端碱性氨基酸等。

3.主要为生产重组胰岛素、降钙素等工具用酶,这里指的是作为工业用酶应用于胰岛素的工业生产。

4. 用于蛋白质的 C末端氨基酸测定

5.应用于国内的科研单位、试剂公司及生物技术公司、制药公司等,如国外各大试剂公司,制药厂和生物技术公司。

羧肽酶B的制备方法

目前制备活性 羧肽酶B的制备方法可分为三类,其一是,从动物的胰腺中提取及活化获得。该法的缺陷在于,由于所获得的CPB可能含有感染其它物质(如病毒或其它有害的生物活性组分)而限制了羧肽酶B的应用;

其二是,经原或真核【 如巴斯德毕赤酵母(Pichia pasforis)】表达得不具活性的羧肽酶原B(procarboxypeptidase B,简称proCPB),再将 proCPB经胰蛋白酶酶解得到活性羧肽酶B 。该法的不足在于,由于表达所得的 proCPB 须经胰蛋白酶"激活"才能获得活性 CPB,且还须再经去除胰蛋白酶和活性肽部分的纯化步骤;

其三是,在细菌或酵母中以融合蛋白形式表达(如β-办乳糖苷酶-proCPB融合蛋白形式表达),但其仍须去除融合蛋白才能获得活性 CPB。

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