辣根过氧化物酶在鲁米诺反应中的作用

发布时间:

2021-05-26


鲁米诺的化学发光反应中,除了需要氧化剂过氧化物氢与碱液中外,还需要用到辣根过氧化物酶HRP(POD中的一种),HRP虽然不参与反应,但是需要它的催化,鲁米诺才能氧化发光。

辣根过氧化物酶来源于辣根,在临床检验中有广泛的作用,它不仅能催化鲁米诺的发光反应,还能催化Trinder’s试剂、TMB、氯苯胺等底物的显色反应。HRP既可以用作生化反应中的指示剂,也可以用作免疫反应(尤其是ELISA)中标记试剂,是酶标抗体的关键原料。辣根过氧化物酶作为多个试剂盒发光体系或显色体系的关键成分,对试剂盒的质量有重要影响。

 

辣根过氧化物酶催化鲁米诺发光

辣根过氧化物酶结构与RZ值:

每一个HRP分子中含一个氯化血红素IX(亚铁原卟啉)作辅基,该辅基在403nm波长处有最大吸收峰,而去辅基的酶蛋白在275nm波长处有最大吸收。RZ(Reinheits Zahl)值即为HRP在403nm的OD值(血红素引起的吸收率)与275nm的OD值(蛋白质引起的吸收率)之比。

辣根过氧化物酶用于免疫分析:

HRP的底物不管是鲁米诺、新型Trinder’s试剂、TMB亦或者其它底物,他们本质是只能检测过氧化氢的量,间接测量生成过氧化氢的待测物质的量。在免疫分析中,检测的对象是抗原或者抗体,它们并不会产生过氧化氢,就需要用HRP及其底物对抗原抗体进行标记,然后添加过氧化氢,才能达到检测目的。而用鲁米诺或其它底物标记抗体是不适用的,鲁米诺若进行标记或取代,发光性能会严重下降,而HRP由于本身就是蛋白质,可以用它来标记抗原抗体,从而完成检测。

同样地,再酶联免疫中,也是用辣根过氧化物酶对抗原或抗体进行标记,而不用其显色底物进行标记。德晟在化学发光领域经验丰富,可提供高纯度的发光试剂鲁米诺以及相关的酶制剂、缓冲剂、

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