蛋白酶K (Proteinase K)在核酸检测中的作用

发布时间:

2021-08-27


对于新冠疫情的防控,重点在于如何有效控制且快速精确的检测。而其中的关键在于能够提取到指定的样品,且需排除样品中的杂质(无关蛋白、核酸酶),而我们排除杂质时较常用的酶便是蛋白酶K

简介

蛋白酶K (Proteinase K) 是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶,主要切割点为脂肪族和芳香族等厌水族胺基酸的羧基端肽键,因为该酶可以降解角蛋白,于是被命名为蛋白酶K。根据其蛋白结晶及分子结构学研究显示该酶属于枯草杆菌蛋白家族,活性位点具有特征性催化三联氨基酸Asp39-His69-Ser224,具有极高的酶活性和广泛的底物特异性,可去除RNA酶和DNA酶的活性,一般生物样品中通常用来降解蛋白质,可从林伯氏白色念球菌中纯化得到并以钙离子作保护剂。

产品应用

新冠病毒的检测中,核酸扩增试验时的处理、提取、扩增是非常高风险的,因此扩增前需要先对标本进行病毒灭活,一般使用新冠核酸试剂组中自带的病毒采样液进行病毒灭活,其中的蛋白酶K是病毒保存液中一个非常重要的成分

病毒保存液有两个作用:

1) 非灭活型病毒保存液:直接裂解病毒释放核酸,消除核酸分解酶(RNase)以防止病毒的RNA降解。

2) 灭活型病毒保存液:灭活病毒,让病毒的蛋白变性,使其失去活性而“死掉”,不再有传染性,提高运输和检测阶段的安全性。

蛋白酶K可降解与核酸紧密结合的组蛋白,分离DNA与蛋白质,使DNA能够更好被提取;另外,蛋白酶K可降解RNA水解酶(RNase)活性,抑制RNase水解模板的RNA,在RNA的提取和检测过程中起到不可或缺的作用,因此蛋白酶K在新冠检测中的意义十分重要。

蛋白酶K储存

干粉状态可在0~4℃条件下低温保存。溶解后分装为适当体积,于-20℃储存。运输可在室温下进行。正确的储存条件下,干粉状态的有效期限可达二年。液体状态在-20℃有效期限为半年。打开包装使用后,如果在2~8℃环境下放置超过一周时间,建议过滤除菌或增加稳定剂如0.5%叠氮化钠,防止微生物污染。

德晟公司不仅生产蛋白酶K,在疫情初期也研发生产出了病毒保存液,包括灭活型和非灭活型两种,一直受到新老客户的好评。随着国外疫情的蔓延,德晟的病毒保存液也走出了国门远销海外。

蛋白酶K,病毒保存液